莱昂纳多
皮特·普劳泽克饰
神龟们的头儿，头脑冷静，英勇果断，以武士刀为兵器。由于行事小心谨慎，把斯普林特老师的教导作为处事准则，常被其他几位神龟兄弟戏称为“斯普林特二世”，但是在紧要关头，往往是神龟们的行动领袖。
米开朗基罗
诺尔·费舍饰
话唠随时随地都耍嘴逗贫，幽默基因早就深入骨髓，神龟中最孩子气的一个，言行幽默，随和体贴，使用的兵器是双节棍。米基的最爱是比萨饼，在平时常常和其他的神龟们拌嘴，但真正闹小矛盾的时候，往往能体贴退让。
拉斐尔
阿伦·瑞奇森饰
性格火爆，但正直善良，嫉恶如仇，兵器是忍者匕首。在战斗中英勇无畏、一往无前，但也会由于火爆的性格而行事鲁莽，在斯普林特老师的教导下，渐渐领悟了作为一名忍者的必要修为。
多纳泰罗
杰瑞米·霍华德饰
性情随和，酷爱科学发明，精通电脑和机械制造，兵器是武士棒。神龟们在与邪恶势力作斗争的时候，往往能用上多纳泰罗发明的各种工具，并发挥出特殊的效果。
艾蓓丽尔·奥尼尔
梅根·福克斯饰
美貌与智慧并重、性感与勇气齐飞的记者，她一直想成为主持人，但她无法放弃刺激的街头采访，那些爆炸性新闻，她热爱自己的工作，还有跟忍者神龟们的合作。
凯西·琼斯
斯蒂芬·阿梅尔饰
面具义警，立志成为纽约警局警探的狱警，但命运却把他领到了另一条路，他因此还被开除出警队。因为看不惯流氓恶棍的行径，通过自学练出一身功夫，善用曲棍球棍、高尔夫球杆、棒球棒等体育器材攻击对手。
